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本試劑盒采用探針法多重實時熒光RT-PCR方法檢測豬全血、血清、淋巴結、脾臟、腎臟、扁桃體、排泄物、口鼻拭子及細胞培養物等樣品中非洲豬瘟病毒（ASFV）的DNA、豬瘟病毒（CSFV）的RNA、豬偽狂犬病毒（PRV）的DNA，適用于非洲豬瘟病毒、豬瘟病毒和豬偽狂犬病毒的檢測。AD-011-0為普通探針法檢測試劑盒；AD-011-1為防污染體系檢測試劑盒，添加dUTP和UNG酶可有效減少氣溶膠等的污染，降低假陽性風險。
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組成 |
100頭份 |
貯藏條件 |
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反轉錄酶混合液 |
110 μL |
-20℃ |
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陰性對照（無核酸酶水） |
1 mL |
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陽性對照 |
20 μL |
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PCR 反應液 |
900 μL |
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熒光探針 |
650 μL |
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說明書 |
1 份 |
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試劑 |
體系 |
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無菌無核酸酶水 |
3×（N+1）μL |
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反轉錄酶混合液 |
1×（N+1）μL |
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PCR 反應液 |
8×（N+1）μL |
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引物、熒光探針混合液 |
6×（N+1）μL |
將以上配制的反應體系充分混勻后，分裝每個反應管中各18 μL。
取2 μL 模板DNA/RNA，加入相應反應管中，混勻并作好標記。在熒光PCR 擴增儀上進行以下反應：反轉錄50 ℃ 5 min，預變性95 ℃ 2 min；循環 95 ℃ 10 s，58 ℃ 35 s，共40 次，每次循環的第二步（58 ℃ 35 s）收集熒光信號（報告基團“FAM、HEX、Cy5”，淬滅基團“None”）。防污染體系在反轉錄步驟（50 ℃ 5 min）之前進行消化步驟25 ℃ 5 min。
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