產(chǎn)品介紹
本試劑盒采用探針法雙重實(shí)時熒光PCR方法檢測羊源基因組DNA。根據(jù)羊線粒體DNA上的cytb基因的特異片段設(shè)計(jì)引物及探針，應(yīng)用兩種不同熒光探針染料在同一反應(yīng)管內(nèi)進(jìn)行目的基因和內(nèi)參基因的雙重檢測。本試劑盒羊源特異引物和探針在綿羊和山羊等的同源區(qū)域進(jìn)行設(shè)計(jì)，綿羊和山羊等均可以檢測，但檢測品種不同，目標(biāo)序列可能有所差異，因此某些品種的羊可能無法檢出。
產(chǎn)品組成
【試劑盒組成】
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組成 |
25μl反應(yīng)×50次 |
貯藏條件 |
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陰性對照（ddH2O） |
1 mL |
-20℃ |
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羊源陽性對照-E7 copies/μL（PTC） |
20 μL |
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2×Probe PCR PreMix for Ovine |
700 μL |
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羊源引物、探針、內(nèi)質(zhì)控Mix（引物Mix） |
110 μL |
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說明書 |
1 份 |
產(chǎn)品指南
按下表配制PCR反應(yīng)體系。
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試劑 |
添加量（每25μL體系） |
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2×Probe PCR PreMix for Ovine |
12.5 μL |
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引物Mix |
2 μL |
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模板DNA* |
1 μL |
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ddH2O |
9.5 μL |
*：陽性對照使用試劑配套陽性對照作為模板DNA添加，陰性對照使用ddH2O即可。
將以上配制的反應(yīng)體系充分混勻后， 瞬時離心使試劑回到管底，在熒光PCR 擴(kuò)增儀上進(jìn)行以下反應(yīng)：95 ℃ 10s；循環(huán) 95 ℃ 5s，60 ℃ 30s，共40 次，每次循環(huán)的第二步（60℃ 30s）收集熒光信號（報(bào)告基團(tuán)“羊源基因-FAM、內(nèi)質(zhì)控-HEX”，淬滅基團(tuán)“None”,使用ABI 7500儀器時，由于無HEX通道建議用VIC通道代替，退火時間設(shè)置為31 s）。
