產品介紹
本試劑盒采用探針法三重實時熒光PCR方法檢測牛、羊源基因組DNA。根據牛和羊線粒體DNA上的cytb基因的特異片段設計引物及探針，應用三種不同熒光探針染料在同一反應管內進行目的基因和內質控基因的三重檢測。本試劑盒牛、羊特異引物和探針在目的基因同源區域進行設計，黃牛、奶牛、牦牛、綿羊和山羊等均可以檢測，但檢測品種不同，目標序列可能有所差異，因此某些品種可能無法檢出。
產品組成
【試劑盒組成】
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組成 |
25μl反應×50次 |
貯藏條件 |
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陰性對照（ddH2O） |
1 mL |
-20℃ |
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牛、羊源陽性對照（PTC） |
20 μL |
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2×Probe PCR PreMix for Bovine and Ovine |
700 μL |
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牛、羊源引物、探針、內質控Mix（引物Mix） |
110 μL |
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說明書 |
1 份 |
產品指南
按下表配制PCR反應體系。
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試劑 |
添加量（每25μL體系） |
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2×Probe PCR PreMix for Bovine and Ovine |
12.5 μL |
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引物Mix |
2 μL |
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模板DNA* |
1 μL |
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ddH2O |
9.5 μL |
*：陽性對照使用試劑配套陽性對照作為模板DNA添加，陰性對照使用ddH2O即可。
將以上配制的反應體系充分混勻后， 瞬時離心使試劑回到管底，在熒光PCR 擴增儀上進行以下反應：95 ℃ 10s；循環 95 ℃ 5s，60 ℃ 30s，共40 次，每次循環的第二步（60℃ 30s）收集熒光信號（報告基團“牛源基因-FAM、羊源基因-ROX、內質控-HEX”，淬滅基團“None”。使用ABI 7500儀器時，由于無HEX通道建議用VIC通道代替，另外退火時間設置為31 s）。
