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本試劑盒根據貓杯狀病毒（FCV）、貓皰癥病毒（FHV）的基因特異片段分別設計引物及熒光探針（FCV -FAM、FHV -Cy5）,同時在貓基因特異片段上設計內質控引物及HEX熒光探針，以樣品核酸作為模板，在同一反應管內進行兩種目的基因和內質控基因的多重RT-PCR檢測。擴增試劑中添加dUTP和溫度敏感型UNG酶可有效減少氣溶膠等的污染，降低假陽性風險。
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組成 |
100頭份 |
貯藏條件 |
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陰性對照（ddH2O） |
1 mL |
-20℃ |
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陽性對照（PTC） |
20 μL |
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20×反轉錄酶混合液（酶Mix） |
110 μL |
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2.5×qPCR 反應液（qMix） |
850 μL |
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2.5×引物及探針混合液*1（引物Mix） |
850 μL |
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說明書 |
1 份 |
*1：該引物及探針混合液中包括貓杯狀病毒（FCV）、貓皰癥病毒（FHV）和貓源內質控的引物、探針等，該混合液使用及保存時請盡量避光。
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試劑 |
體系 |
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20×反轉錄酶混合液 |
1×（N+1）μL |
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2.5×qPCR 反應液 |
8×（N+1）μL |
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2.5×引物及探針混合液 |
8×（N+1）μL |
§ 將以上配制的反應體系充分混勻后，分裝每個反應管中各17 μL。取3 μL 模板DNA/RNA，加入相應反應管中，混勻并作好標記。
§ 在熒光PCR 擴增儀上進行以下反應：UNG酶消化25 ℃ 5 min，反轉錄55 ℃ 5 min，預變性95 ℃ 2 min；循環 95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共40 次，每次循環的第二步（60 ℃ 30 s）收集熒光信號（報告基團“FCV-FAM、IC-HEX、FHV-Cy5”，淬滅基團“None”）。
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